PPL质粒共享库基于其庞大的慢病毒质粒库、CART研发平台,对外提供稳转细胞株构建与筛选服务。
服务项目:
基因敲除细胞系建立
基因敲入细胞系建立
基因定点突变细胞系建立
服务流程:
1、预实验:客户提供靶细胞,我们进行靶细胞培养(特殊细胞需要客户提供培养基)。
2、设计高效的sgRNA。
3、构建sgRNA/Cas9表达载体。
4、使用构建好的表达载体转染靶细胞。
5、挑选单克隆扩大培养
6、多个单克隆基因组测序。
7、选择发生变异的单克隆进行TA克隆测序。
8、挑选阳性单克隆细胞株进行验证。
9、对目标单克隆扩大培养,交付细胞株(≧1)。
客户提供:
目的基因序列信息(Gen Bank Accession number、Gene ID、关键词);
细胞类型及名称(也可选择由PPL代购),细胞培养条件。
最终交付:
sgRNA序列;
基因敲除/敲入/突变单克隆细胞系;
sgRNA-Cas9基因敲除/敲入/突变质粒鉴定测序结果;
结题报告(包括实验步骤、测序结果及相关原始图片)。