细胞自噬 
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    细胞自噬
    发稿时间:2017-08-11 10:25:04  【字体:      

        细胞自噬(autophagy or autophagocytosis):又称为Ⅱ型细胞死亡,是细胞在自噬相关基因(autophagy related geneAtg)的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。

            LC3light chain 3)简称于MAP1LC3 (microtubule-associated proteins light chain 3),是目前公认的自噬标记物。哺乳动物中的LC3与酵母中的自噬相关蛋白Apg8/Aut7/Atg8具有同源性。LC3蛋白合成后在其羧基端被Atg4剪切,暴露甘氨酸残基,产生细胞浆定位的LC3-I。在自噬过程中,LC3-I会被包括Atg7Atg3在内的泛素样体系修饰和加工,与磷脂酰乙醇胺(PE)共价结合,形成LC3-II并定位于自噬体膜上(见图3)。哺乳动物中的LC3可分为三种: LC3ALC3BLC3C。 其中,LC3B作为LC3的一种,同样可以用作自噬的分子标志。


    自噬研究工具之LC3

    货号

    品名

    规格

    LV00191-2e

    mCherry-EGFP-LC3B(Human)慢病毒滴度液

    >1*10^8TU/ml

    LV50026-2c

    mCherry-EGFP-LC3B(Mouse)慢病毒滴度液

    >1*10^8TU/ml

    PY0001-1

    A549-mCherry-EGFP-LC3B (human)细胞株

    1×10^6 cells

           mCherry-GFP-LC3B自噬双标系统的工作原理为: 未发生自噬的细胞及含有自噬体的细胞中,由于mCherryGFP共同表达,细胞呈现黄色荧光。当自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体后,酸性的溶酶体环境使酸敏感的GFP荧光淬灭,而mCherry不受影响,进而使自噬溶酶体呈现红色荧光。因此,红色荧光可指示自噬溶酶体形成的顺利程度。红色荧光越多,绿色荧光越少,则从自噬体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之,自噬体和溶酶体融合被抑制,自噬溶酶体进程受阻。

    ·简便直观,实现自噬可视化;

    ·准确指示,实现自噬流监测。

    自噬研究工具之线粒体


    线粒体自噬是一种选择性清除受损线粒体的特异性自噬现象,根据线粒体自噬过程的特征,可将其分为4个时期:

    1) 前期线粒体受损后发生通透性转变,导致线粒体去极化,诱导线粒体自噬相关蛋白活化;

    2) 早期自噬体包裹受损线粒体,形成线粒体自噬体(Mitophagosomes);

    3) 中期线粒体自噬体与溶酶体融合后形成成熟的线粒体自噬溶酶体(Mitolysosomes);

    4) 末期线粒体被溶酶体降解。 

    目前研究线粒体自噬及其活性的方法主要包括以下3种类型 :

    1) 通过电子显微镜或荧光显微镜直接观察线粒体自噬体的结构或线粒体自噬的动态过程;

    2) 通过流式细胞术检测线粒体膜电位、线粒体总量及免疫印迹技术检测线粒体自噬相关蛋白表达量的变化等方法间接反映线粒体自噬活性;

    3) 通过人为对线粒体自噬通路进行实验性调节来全面评价线粒体自噬对细胞或机体形态和功能的影响。

     

    货号

    品名

    规格

    LV01229-2a

    TagRFP-GFP-Fis1(101-152end)慢病毒滴度液

    >1*10^8TU/ml

    LV01230-2a

    mt-Keima-COX8慢病毒滴度液

    >1*10^8TU/ml

            线粒体分裂蛋白Fis1与线粒体动力蛋白Drp1相互作用来促进线粒体的分裂,参与线粒体自噬的调节高表达Fis1能够促进线粒体自噬的发生。

           mKeima稳定表达一种在酸性和中性条件下分别发射红色和绿色荧光的天然蛋白,可用于线粒体自噬体和线粒体自噬溶酶体的定性和定量分析。通过将COX8的前导肽序列与mKeima串联起来构成一种融合基因mt-mKeima,使其所表达的Keima蛋白定位于线粒体基质,当线粒体自噬体与酸性溶酶体融合后Keima蛋白的荧光信号由绿色转为红色,荧光信号的转换可定量反映线粒体自噬的活性。


    自噬研究工具之质粒      (更多质粒与慢病毒产品,请在质粒与慢病毒产品版块查询。感谢支持!)

    货号

    名称

    种属

    基因号

    类型

    PPL00043-2c

    pDsRed1-N1-Beclin1

    Human

    8678

    过表达

    PPL00191-2b

    pDsRed1-N1-LC3B

    Human

    81631

    过表达

    PPL00361-2a

    pEGFP-C3-ATG3

    Human

    64422

    过表达

    PPL00362-2a

    pEGFP-C3-ATG12

    Human

    9140

    过表达

    PPL00363-2a

    pEGFP-C3-LC3A

    Human

    84557

    过表达

    PPL00364-2a

    p3*FLAG-Myc-CMV-UVRAG

    Human

    7405

    过表达

    PPL50026-2a

    pEGFP-C3-LC3B

    Mouse

    67443

    过表达

    PPL70001-2a

    pmCherry-EGFP-LC3

    Rat

    64862

    过表达

    PPL00951-2a

    pCMV-Flag-RPTOR

    Human

    57521

    过表达

    PPL00953-2a

    pCMV-MTOR-Flag

    Human

    2475

    过表达

    PPL00954-2a

    pCMV-Flag-Atg16L1

    Human

    55054

    过表达

    PPL00956-2a

    pCMV-Flag-PIK3R4(T231R)

    Human

    30849

    过表达

    PPL00957-2a

    pCMV-Flag-MLST8

    Human

    64223

    过表达

    PPL00958-2a

    pCMV-Flag-Atg4a

    Human

    115201

    过表达

    PPL00959-2a

    pCMV-Flag-Atg4c

    Human

    84938

    过表达

    PPL00960-2a

    pCMV-Flag-Atg4d

    Human

    84971

    过表达

    PPL00961-2a

    pCMV-Flag-RICTOR

    Human

    253260

    过表达

    PPL01038-2a

    pCMV-Flag-ATG2B

    Human

    55102

    过表达

    PPL01039-2a

    pCMV-Flag-ATG9A

    Human

    79065

    过表达

    PPL01040-2a

    pCMV-Flag-ATG9B

    Human

    285973

    过表达

    PPL00156-3a

    pLKO.1-PLAUR shRNA-1

    Human

    5329

    敲降

    PPL00690-3a

    pLKO.1-SDC1 shRNA-1

    Human

    6382

    敲降

    PPL00721-3a

    pPLK/GFP+Puro-LGR5 shRNA-1

    Human

    8549

    敲降

    PPL00955-3a

    pLKO.1-DNA2 shRNA-1

    Human

    1763

    敲降

    PPL00042-3a

    pPLK/GFP+Puro-ATG5 shRNA-1

    Human

    9474

    敲降

    PPL00043-3b

    pPLK/GFP+Puro-Beclin1 shRNA-1

    Human

    8678

    敲降

    PPL00180-3a

    pPLK/GFP+Puro-PRAS40 shRNA-1

    Human

    84335

    敲降

    PPL00191-3a

    pPLK/GFP+Puro-LC3 shRNA-1

    Human

    81631

    敲降

    PPL00304-3a

    pPLK/GFP+Puro-ATG7 shRNA-1

    Human

    10533

    敲降

    PPL00305-3a

    pPLK/GFP+Puro-Vps34 shRNA-1

    Human

    5289

    敲降

    PPL00361-3a

    pPLK/GFP+Puro-ATG3 shRNA-1

    Human

    64422

    敲降

    PPL00362-3a

    pPLK/GFP+Puro-ATG12 shRNA-1

    Human

    9140

    敲降

    PPL00948-3a

    pPLK/GFP+Puro-ATG4B shRNA-1

    Human

    23192

    敲降

    PPL00951-3a

    pPLK/GFP+Puro-Raptor shRNA-1

    Human

    57521

    敲降




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