关于科研CAR-T技术服务项目，我们提供的大致流程如下：

1   抗原制备

根据客户提供的靶点抗原的基因信息，进行分析，构建胞外段蛋白真核表达载体，并进行蛋白表达。

周期8~12周。

2   单克隆抗体制备

使用流程1获得的蛋白抗原进行小鼠免疫，获得免疫效果后取小鼠脾细胞进行细胞融合，使用抗原蛋白进行筛板，挑选有效的单克隆抗体细胞株，并表达纯化抗体。我们在蛋白抗原免疫的同时，还会额外使用DNA免疫的方法同时免疫其他对照小鼠，免疫效果好的也会列入下游筛选流程。

周期4~6月。

3  scFv调取

提取流程2获取的单克隆抗体细胞株RNA，逆转录获得cDNA模板，调取抗体CDR区基因序列，测序比对，优化序列后，将VH与VL克隆连接形成scFv表达质粒。

周期2~4周。

4  CAR载体构建

使用流程3获取的scFv，根据客户需求的CAR的代次，构建完整的CAR慢病毒表达载体。

周期3~4周。

5  慢病毒包装

使用流程4获得Lenti-CAR进行慢病毒包装，获得不低于10⁷的慢病毒滴度液，用于CAR-T细胞的制备。

周期2~4周。

6  CAR-T细胞制备与扩增

使用流程5获得的慢病毒滴度液感染T细胞，获得表达CAR基因的效应T细胞，并检测转导效率。

周期3~4周。

7  体外细胞杀伤实验

使用流程6获得的效应T细胞，进行肿瘤靶细胞、靶抗原稳转细胞、对照细胞等细胞株共培养杀伤实验。

周期与费用，根据实际实验安排，待定。

8  裸鼠动物模型构建与体内杀伤实验

构建目标肿瘤裸鼠动物模型，并使用流程6获得的效应T细胞进行治疗处理，设置实验对照组，获取实验数据。

周期与费用，根据实际实验安排，待定。

关于scFv的筛选，有第二套方案可供选择，具体流程如下：

1   抗原制备

根据客户提供的靶点抗原的基因信息，进行分析，构建胞外段蛋白真核表达载体，并进行蛋白表达。

周期约8~12周。

2   小鼠免疫

使用流程1获得的蛋白抗原，进行小鼠免疫，获得免疫效果后取小鼠脾脏。我们在蛋白抗原免疫的同时，还会额外使用DNA免疫的方法同时免疫其他对照小鼠，免疫效果好的也会列入下游筛选流程。

周期2~3月。

3  scFv筛选

提取流程2获取的免疫后小鼠脾脏RNA，逆转录获得cDNA模板，使用通用引物调取抗体CDR区基因序列，获得大量混合的VH和VL序列，测序比对，并使用QPCR分析表达丰度，选择高表达VH和VL随机组合，高通量PCR完整表达构建，高通量转染，再使用流程1获得的胞外段蛋白进行筛板，获取有效的scFv序列。

周期2个月左右

该方案的特点是，周期短，可以筛到尽可能多的scFv序列。

后续流程与上面的方案流程一致。

服务合作方式：

双方签订合同后，我们将安排实验，采取阶段式付费方式。按照上述流程，每完成一个环节，会将相关结果交付给客户，付费后，进行下一环节实验安排。最终的实验数据与实验材料都将归客户所有。