CAR-T技术服务项目 
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    CAR-T技术服务项目
    发稿时间:2017-08-03 00:00:00  【字体:      

    关于科研CAR-T技术服务项目,我们提供的大致流程如下:

    1   抗原制备

    根据客户提供的靶点抗原的基因信息,进行分析,构建胞外段蛋白真核表达载体,并进行蛋白表达。

    周期8~12周。

    2   单克隆抗体制备

    使用流程1获得的蛋白抗原,利用巴傲得的专利技术(一种单克隆杂交瘤的制备方法,专利号:ZL2012 1 0280494.4)进行小鼠免疫,获得免疫效果后取小鼠脾细胞进行细胞融合,使用抗原蛋白进行筛板,挑选有效的单克隆抗体细胞株,并表达纯化抗体。我们在蛋白抗原免疫的同时,还会额外使用DNA免疫的方法同时免疫其他对照小鼠,免疫效果好的也会列入下游筛选流程。

    周期4~6月。

    3  scFv调取

    提取流程2获取的单克隆抗体细胞株RNA,逆转录获得cDNA模板,调取抗体CDR区基因序列,测序比对,优化序列后,将VH与VL克隆连接形成scFv表达质粒。

    周期2~4周。

    4  CAR载体构建

    使用流程3获取的scFv,根据客户需求的CAR的代次,构建完整的CAR慢病毒表达载体。

    周期3~4周。

    慢病毒包装

    使用流程4获得Lenti-CAR进行慢病毒包装,获得不低于107的慢病毒滴度液,用于CAR-T细胞的制备。

    周期2~4周。

    6  CAR-T细胞制备与扩增

    使用流程5获得的慢病毒滴度液感染T细胞,获得表达CAR基因的效应T细胞,并检测转导效率。

    周期3~4周。

    体外细胞杀伤实验

    使用流程6获得的效应T细胞,进行肿瘤靶细胞、靶抗原稳转细胞、对照细胞等细胞株共培养杀伤实验。

    周期与费用,根据实际实验安排,待定。

    裸鼠动物模型构建与体内杀伤实验

    构建目标肿瘤裸鼠动物模型,并使用流程6获得的效应T细胞进行治疗处理,设置实验对照组,获取实验数据。

    周期与费用,根据实际实验安排,待定。

     

    关于scFv的筛选,有第二套方案可供选择,具体流程如下:

    1   抗原制备

    根据客户提供的靶点抗原的基因信息,进行分析,构建胞外段蛋白真核表达载体,并进行蛋白表达。

    周期约8~12周。

    2   小鼠免疫

    使用流程1获得的蛋白抗原,进行小鼠免疫,获得免疫效果后取小鼠脾脏。我们在蛋白抗原免疫的同时,还会额外使用DNA免疫的方法同时免疫其他对照小鼠,免疫效果好的也会列入下游筛选流程。

    周期2~3月。

    3  scFv筛选

    提取流程2获取的免疫后小鼠脾脏RNA,逆转录获得cDNA模板,使用通用引物调取抗体CDR区基因序列,获得大量混合的VH和VL序列,测序比对,并使用QPCR分析表达丰度,选择高表达VH和VL随机组合,高通量PCR完整表达构建,高通量转染,再使用流程1获得的胞外段蛋白进行筛板,获取有效的scFv序列。

    周期2个月左右

    该方案的特点是,周期短,可以筛到尽可能多的scFv序列。

    后续流程与上面的方案流程一致。

    服务合作方式:

    双方签订合同后,我们将安排实验,采取阶段式付费方式。按照上述流程,每完成一个环节,会将相关结果交付给客户,付费后,进行下一环节实验安排。最终的实验数据与实验材料都将归客户所有。

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