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    慢病毒包装服务
    发稿时间:2017-07-07 10:37:25  【字体:      

    慢病毒包装服务

       慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

      慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的儿率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。

    PPL拥有庞大的慢病毒质粒库,成熟的慢病毒包装体系,强大的技术团队,千余例成功服务案例,合理的流程安排,优惠的服务价格。为科研用户提供慢病毒包装服务。

    服务流程:

     (一) 慢病毒过表达质粒包装流程:

             1、用户提供构建好的目的基因慢病毒表达质粒,或提供基因模板选择PPL质粒构建服务,PPL质粒库有模板的,免费提供。根据您的要求选择适合的慢病毒骨架载体。

             2、选择合适的包装系统,PPL通常使用的是三质粒或四质粒包装系统。将表达质粒和包装辅助质粒进行高纯度无内毒素抽提。

    3、将2中抽提的质粒共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基。

    44872小时后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,纯化、浓缩、分装。

    5、根据表达载体所含元件的情况,选择合适的方法进行滴度测定。

    (二) 慢病毒shRNA 质粒包装流程:

    1、用户提供构建好的含有干扰目的基因把序列的慢病毒质粒,或提供基因信息,由PPL设计并构建慢病毒shRNA质粒。用户可以免费选用PPL慢病毒质粒库里现货质粒。

            2PPL构建的质粒一般为3个靶点质粒,保证至少一个有效。用户可以选择靶点优化,选择效果最佳靶点质粒进行包装,也可以3个靶点质粒都进行包装。

    3、选择合适的包装系统,PPL通常使用的是三质粒或四质粒包装系统。将shRNA质粒和包装辅助质粒进行高纯度无内毒素抽提。

    4、将2中抽提的质粒共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基。

    54872小时后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,纯化、浓缩、分装。

    6、根据表达载体所含元件的情况,选择合适的方法进行滴度测定。

     

    项目

    滴度

    周期

    对照

    过表达质粒包装

    1x108TU

    3-4

    赠送同等体积

    SHRNA 质粒包装

    1x108TU

    3-4

    赠送同等体积

     

    可单独提供对照慢病毒滴度液:

    项目

    滴度

    Lv-GFP-puro (过表达对照)(绿色荧光)

         ≥1x108TU

    Lv-RFP-puro (过表达对照)(红色荧光)

         ≥1x108TU

    Lv-mCherry-puro (过表达对照)(红色荧光)

         ≥1x108TU

    Lv-shNC-GFP/puro(RNAi对照)(绿色荧光)

         ≥1x108TU

    Lv-sh-GFP/puro(RNAi对照)(绿色荧光)

         ≥1x108TU

     

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