一、基本信息

名称

A549- mCherry -EGFP-LC3B(human)稳转细胞株

货号

PY0001-1

包装

1×10⁶/ml 冻存细胞

组织来源

肺癌细胞系

细胞形态

贴壁

重组基因

mCherry-EGFP-LC3B (Human)

抗性基因

无

培养基

DMEM 高糖培养基，10%胎牛血清

消化液

0.25%胰蛋白酶，0.53mM EDTA

冻存液

90%完全培养基，10%DMSO

培养条件

37℃，5% CO₂

运输条件

冻存细胞干冰运输或活细胞常温运输

储存条件

液氮/-80℃

用途

用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化，仅供科研实验使用

二、产品介绍

A549细胞稳定过表达mCherry-C1-EGFP-LC3B，条件处理导致细胞自噬发生，自噬小体进入第二阶段后，与溶酶体进行融合，形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境，可以导致PH下降，EGFP因酸敏感而淬灭，因此，EGFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度，EGFP越少，则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之，自噬小体和溶酶体融合被抑制，自噬溶酶体进程受阻。mCherry是一直稳定表达的，因而可以通过EGFP与mCherry的亮点比例来评价自噬流进程。

三、细胞培养

1、细胞复苏：将含有1 ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中快速摇晃至溶解，移入离心管中，加入4 ml培养基混合均匀，500g，离心5 min，弃上清液，加完全培养基重悬细胞，移入培养瓶培养，第二天更换培养液并检查细胞密度。

2、细胞传代：当细胞密度达80%-90%，可进行传代培养。对于悬浮细胞，参考以下方法传代培养：

a 收集细胞，500g，离心5 min，弃上清液，补加1~2 ml培养液后吹打均匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含完全培养基的培养皿或瓶中。

b 可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含新鲜培养基的培养皿或瓶中。

c 细胞密度保持在4 *10^5 至 3*10^6 cells/ml，根据细胞密度每2~3天补液1次。

3、细胞冻存：收集细胞，500g，离心5 min，弃上清液，加入1 ml细胞冻存液（含20% FBS+10% DMSO）轻轻悬浮细胞，移入冻存管后进行冻存。

四、代表性数据

见说明书

五、相关产品与服务

1、GFP、RFP和/或Luciferase标记的各种肿瘤细胞系

2、基因过表达稳转细胞系

3、基因敲降稳转细胞系

六、限制性使用许可

1) 本产品仅供购买方单方使用，不得向任何第三方赠送、转让或销售。

2) 本产品仅供实验室和体外研究使用，不能用于任何临床检验、诊断、治疗，或任何非法用途。